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單個分子光學檢測儀器的搭建和應用

時間:2007-12-27 15:42:00來源:caojing

導語:?單個分子光學檢測技術是近20年來迅速發展起來,并在生命科學領域有廣泛應用的一項新興技術。
單個分子光學檢測技術是近20年來迅速發展起來,并在生命科學領域有廣泛應用的一項新興技術。 以單個分子為研究對象可以得到基于單個分子的統計行為,這同傳統的大量分子體系實驗所得的平均值相比包含更多更深層次的信息。同時,在單個分子水平上可以直接觀察單個事件的發生與發展,這在傳統的大量分子體系中是做不到的。這一技術為生命過程在分子水平上的可視化開辟了道路。 在Nikon TE30倒置顯微鏡的基礎上,我們搭建了遠場寬場照明單個分子檢測系統。寬場照明的基本原理如圖1。人射的平行光經過物鏡匯聚后在激發焦平面內形成尺寸可控的光區,從而激發一定范圍的樣品。經估算本套裝置的光檢測效率約為3%。
圖 1寬場照明激發示意圖
圖2單個24聚體蛋白分子的擴散均方根位移隨時間的變化
在單個分子的水平上觀察到小熱休克蛋白16.5二十四聚體的布朗運動和其它動力學過程。圖2是擴散運動的例子。利用Einstein關系式(=4Dt),通過擬合圖中數據得到擴散系數(1.0x101em=/s)與理論值(1.56x 10“cmz/s)相符。

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